期刊简介
本刊是全国性肿瘤学术期刊（双月刊）。读者对象为从事肿瘤防治、研究的工作者和高、中级卫生人员。报道内容有：肿瘤的临床研究、基础研究、防治、调查报告、综述、临床病理讨论、最新动态、病例报道和简讯等。
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首页>中国癌症杂志
- 杂志名称：中国癌症杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：复旦大学附属肿瘤医院
- 国际刊号：1007-3639
- 国内刊号：31-1727/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国科技核心期刊及全国肿瘤类核心期刊期刊收录：维普收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
沉默二氢叶酸还原酶基因对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响
李状；张玮；王琪；阳志军；李力
关键词：pGCSIL/GFP载体, 二氢叶酸还原酶, 高效液相色谱法, 凋亡, 透射电子显微术
摘要：背景与目的：二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase，DHFR)在卵巢上皮癌铂类耐药细胞中高表达。该研究旨在探讨DHFR基因沉默对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响，为卵巢癌铂类耐药的治疗奠定基础。方法：设计DHFR基因靶向的发夹状siRNA，筛选出佳siRNA沉默片段，构建携带有目的基因的慢病毒载体细胞即转染组(DHFR-pGCSIL-SKOV3细胞)及阴性对照组细胞(pGCSIL-SKOV3细胞)。采用流式细胞仪检测3组细胞在不同的顺铂质量浓度(2.5、5.0、10.0和20.0μg/mL)下不同时间段(24、48及72 h)的凋亡情况以及IC50顺铂质量浓度(4.4μg/mL)的周期变化；采用高效液相色谱法检测不同顺铂质量浓度(2.5、5.0和7.5μg/mL)不同时间段(24和48 h)药物作用后3组细胞内的顺铂浓度。采用透射电镜观察IC50顺铂质量浓度(4.4μg/mL)3种细胞的超微结构变化。结果：将退火后的双链寡核苷酸片段连接到pGCSIL/GFP载体，测序结果正确。转染SKOV3细胞后，蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定干扰效果。在给药24、48和72 h后，DHFR-pGCSIL-SKOV3、pGCSIL-SKOV3及SKOV3三组细胞的凋亡率随着顺铂质量浓度(2.5、5.0、10.0和20.0μg/mL)的上升而升高， DHFR-pGCSIL-SKOV3细胞给药48和72 h后的凋亡率明显高于pGCSIL-SKOV3及SKOV3细胞，差异有统计学意义(P<0.05)。3组细胞在IC50顺铂质量浓度(4.4μg/mL)给药24和48 h后，转染组G0/G1期细胞比例较阴性及空白对照组明显增多，G2/M、S期则反之；而给药72 h后，3组细胞以G2/M及S期为主，转染组低于阴性及空白对照组。采用高效液相法检测细胞内顺铂质量浓度时，转染组在2.5和5.0μg/mL顺铂质量浓度给药24和48 h后，其细胞内顺铂浓度均明显高于对照组。转染组在7.5μg/mL顺铂质量浓度给药24 h后，其细胞内顺铂浓度均明显低于对照组细胞，在48 h后却又高于对照组，差异有统计学意义(P=0.034，P=0.014)。未给药时，转染组细胞的微丝明显多于对照组，线粒体亦改变明显。IC50(4.4μg/mL)给药24和48 h后3组细胞均未见微丝；而给药72 h后微丝明显增多，且排列紊乱。结论：成功构建携带DHFR基因的pGCSIL干扰慢病毒载体的卵巢癌细胞。通过对DHFR下调后耐药性能研究得知，DHFR的下调与经过铂类药物作用的体外卵巢癌细胞的药物耐药性有一定的联系，卵巢癌细胞中下调DHFR基因可以考虑作为多药耐药的逆转机制。
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