hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451通过调控MDRl/P-gp的表达和功能参与卵巢癌和乳腺癌细胞耐药

摘要：背景与目的：肿瘤细胞耐药是临床化疗失败的主要原因，微小RNA(microRNA，miRNA)在肿瘤细胞中的异常表达与耐药关系密切。本研究旨在探讨卵巢癌及乳腺癌细胞中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表达差异及其与耐药的关系。方法：用浓度递增法建立卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol；颈环状引物实时定量聚合酶链反应(stem-loop quantitative real-time PCR，stem-loop RT-PCR)检测卵巢癌耐紫杉醇细胞A2780/Taxol和亲本细胞A2780以及乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM和亲本细胞MCF-7中hsa-miRNA27a和hsa-miRNA451的表达；利用LipofectamineTM 2000分别将成熟miRNA27a的模拟物、阻遏物及阴性对照(negative control，NC)RNA转染A2780和A2780/Taxol细胞，将成熟miRNA451的模拟物及NC转染MCF-7/ADM细胞；RT-PCR技术检测细胞MDR1 mRNA表达；蛋白[质]印迹法(Western blot)检测细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的表达；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况。结果：miRNA27a在A2780/Taxol细胞中高表达，与A2780细胞相比，表达增高2.2±0.30倍，差异有统计学意义(P<0.05)；miRNA451在MCF-7/ADM细胞中低表达，与MCF-7细胞相比，表达降低84%，差异有统计学意义(P<0.05)。A2780/Taxol细胞转染miRNA27a阻遏物后，MDR1 mRNA表达明显下降，与转染NC组相比，表达下降(39±0.14)%，差异有统计学意义(P<0.05)。P-gp相对表达量[(26±5.3)%)]与转染NC组的P-gp相对表达量[(43±6.7)%]比较，下降39%，差异有统计学意义(P<0.05)。对紫杉醇的敏感性增加，半数抑制浓度(IC50)为0.53μmol/L，与转染NC组IC50(6.8μmol/L)相比，差异有统计学意义(P<0.05)。A2780细胞转染miRNA27a模拟物后，细胞的MDR1 mRNA表达升高，与转染NC组相比，升高(121±0.11)%，差异有统计学意义(P<0.05)；细胞对紫杉醇的敏感性下降，IC50为0.2μmol/L，与转染NC组IC50(0.06μmol/L)相比，差异有统计学意义(P<0.05)。MCF-7/ADM细胞转染miRNA451模拟物后，MDR1 mRNA表达明显下降，与转染NC组细胞相比，表达下降(65±12)%，差异有统计学意义(P<0.05)；P-gp相对表达量[(31±19)%)]与转染NC组细胞P-gp相对表达量[(83±12)%]相比，下降62%，差异有统计学意义(P<0.05)；对阿霉素的敏感性增加，IC50为4.61μmol/L，与转染NC组细胞IC50(26μmol/L)相比，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：在卵巢癌耐紫杉醇细胞A2780/Taxol和乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADM中，miRNA27a和miRNA451分别异常表达，它们可能分别通过间接或直接作用于MDR1/P-gp，参与肿瘤细胞耐药的发生、发展。